Tại Công nghệ sinh học Prisys, chúng tôi thừa nhận mối quan tâm ngày càng tăng đối với các loại thuốc dựa trên oligonucleotide{0}}, đặc biệt là phương pháp điều trị bằng RNA can thiệp nhỏ (siRNA). siRNA đại diện cho thế hệ thuốc điều trị thứ ba sau thuốc phân tử nhỏ và liệu pháp dựa trên kháng thể-, đồng thời đã cho thấy tiềm năng to lớn trong việc cách mạng hóa lĩnh vực phát triển thuốc.
Cơ chế hoạt động của siRNA:
siRNA là các chuỗi nucleotide ngắn gồm khoảng 20 bazơ sử dụng nguyên tắc ghép cặp bazơ Watson{1}}Crick để liên kết với các chuỗi mRNA bổ sung, do đó ảnh hưởng đến quá trình phiên mã và dịch mã. Dựa trên các biến thể về cấu trúc và cơ học của chúng, siRNA được phân loại thành oligonucleotide antisense (ASO), RNA can thiệp nhỏ (siRNA), RNA kích hoạt nhỏ (saRNA), microRNA (miRNA) và aptamer. Trong số này, siRNA đã thu hút được sự chú ý đáng kể nhờ hiệu quả điều trị đầy hứa hẹn và những tiến bộ công nghệ.
Tầm quan trọng của việc cải tiến hóa chất và hệ thống phân phối:
Các siRNA chưa được sửa đổi có thời gian bán hủy ngắn-và có nguy cơ gây độc-ngoài mục tiêu. Sửa đổi hóa học và hệ thống phân phối phù hợp đóng một vai trò quan trọng trong việc đạt được hiệu quả điều trị. Sáu loại thuốc siRNA được phê duyệt đề cập trước đó đã trải qua các biến đổi hóa học, chẳng hạn như biến đổi xương sống photphorothioate và biến đổi ribose như 2'-O-Methyl (2-OMe), 2'-O-Methoxyethyl (2-MOE) và 2'-Fluoro (2-F). Hơn nữa, hiệu quả của việc phân phối siRNA phụ thuộc vào các hệ thống phân phối tiên tiến như liên hợp LNP và GalNAc, cả hai đều đã chứng minh được khả năng nhắm mục tiêu vào gan.
Đánh giá an toàn tiền lâm sàng và lựa chọn loài động vật:
Đánh giá độ an toàn tiền lâm sàng của thuốc siRNA liên quan đến việc đánh giá độc tính mục tiêu-cụ thể và độc tính ngoài mục tiêu-trong mô hình động vật. Việc lựa chọn các loài động vật, bao gồm cả loài gặm nhấm và các loài linh trưởng không phải con người (NHP), phụ thuộc vào đặc điểm cụ thể của thuốc siRNA. Ví dụ, các loài linh trưởng thể hiện tính tương đồng cao với con người về trình tự mRNA mục tiêu và đưa ra đánh giá tốt hơn về dược động học và dược lực học của siRNA. Việc sử dụng các loài linh trưởng không phải con người-để đánh giá độ an toàn là một thông lệ phổ biến, đặc biệt đối với các loại thuốc siRNA nhắm vào gan.
Độc tính gan và phản ứng miễn dịch:
Gan là cơ quan quan trọng được quan tâm trong liệu pháp siRNA. Các loại thuốc siRNA được phê duyệt đã chứng minh nhiều đặc điểm khác nhau liên quan đến khả năng phân phối-đặc hiệu của gan, sự hấp thu của tế bào gan và khả năng gây độc cho gan. Các nghiên cứu mô bệnh học đã cho thấy hiện tượng không bào hóa tế bào gan, thâm nhiễm viêm và tăng nhẹ các men gan như alanine transaminase (ALT) và aspartate transaminase (AST). Các phản ứng miễn dịch, bao gồm kháng thể kháng-thuốc (ADA), giải phóng cytokine, kích hoạt bổ thể và xác định kiểu hình miễn dịch cũng đã được đánh giá và theo dõi.
Việc làm im lặng gen qua trung gian siRNA- mang lại tiềm năng điều trị to lớn. Tuy nhiên, việc đạt được độ im lặng chính xác có thể là một thách thức. Các hiệu ứng-mục tiêu tắt, trong đó siRNA vô tình ngăn chặn các gen ngoài ý muốn, có thể dẫn đến những hậu quả không lường trước được. Cơ quan Quản lý Dược phẩm và Thiết bị Y tế Nhật Bản (PMDA) công nhận điều này trong "Hướng dẫn đánh giá an toàn phi lâm sàng của các sản phẩm điều trị bằng oligonucleotide", phân loại độc tính của siRNA thành các loại mục tiêu và loại không nhắm mục tiêu.
Gan: Mục tiêu hàng đầu, mối quan tâm hàng đầu
Gan là cơ quan quan tâm chính của thuốc siRNA. Để tìm hiểu sâu hơn, chúng tôi phân tích sáu loại thuốc siRNA được bán trên thị trường, tập trung vào đặc tính của thuốc, dược động học và bệnh lý quan sát được. Đáng chú ý là tất cả sáu gen liên quan đến gan- đều có vai trò tổng hợp hoặc biểu hiện. Ngoài ra, chúng còn được biến đổi về mặt hóa học, như thiophosphate, có thể góp phần gây độc cho gan thông qua khả năng liên kết với protein cao. Cả liên hợp hạt nano lipid (LNP) và N-acetylgalactosamine (GalNAc) đều tạo điều kiện thuận lợi cho việc nhắm mục tiêu vào gan. Ví dụ: 80-90% LNP trong Patisiran, một loại thuốc LNP{10}}siRNA, tích tụ trong gan khi tiêm tĩnh mạch. GalNAc{11}}siRNA sử dụng quá trình nội bào qua trung gian ASGPR để hấp thu nội bào, với ASGPR được biểu hiện cao ở tế bào gan.
Hồ sơ độc tính của gan: Từ tích lũy đến viêm
Các phân tích phân bố mô luôn cho thấy nồng độ siRNA cao nhất trong gan. Ví dụ: Lumasiran có AUC là 76700 h*ug/mL và thời gian bán thải là 409 giờ ở khỉ ở liều 10 mg/kg. Đáng chú ý là các nghiên cứu dài hạn về độc tính trên khỉ-đã cho thấy những thay đổi về mô bệnh học ở gan phụ thuộc vào liều lượng-:
1. Hạt ưa bazơ của tế bào gan/tế bào Kupffer: Chúng có thể đại diện cho thuốc, chất chuyển hóa của nó hoặc sự thích ứng của tế bào với oligonucleotide.
2. Tạo không bào cho tế bào gan: Có thể là tác dụng phụ do tích tụ các hạt ưa bazơ trong tế bào chất.
3. Xâm nhập viêm: Nồng độ thuốc cao có thể kích hoạt các con đường gây viêm-.
4. Hoại tử tế bào đơn{1}}tế bào gan: Tổn thương bệnh lý nghiêm trọng xảy ra ở liều cao kèm theo sự tích tụ hạt ưa bazơ trên diện rộng.
Các dấu hiệu sinh hóa máu tăng cao như ALT và AST thường đi kèm với những thay đổi này. Tuy nhiên, việc đánh giá toàn diện tổn thương mô, những thay đổi chỉ số liên quan, khả năng đảo ngược và những phát hiện tương tự ở các loại thuốc siRNA khác là rất quan trọng để xác định tác hại thực sự của những thay đổi này.
Ngoài gan: Tắt-Độc tính mục tiêu và kích thích miễn dịch
Tính bổ sung trình tự-độc lập với-độc tính của mục tiêu cũng cần được chú ý. Phản ứng kích thích miễn dịch, phần lớn phụ thuộc vào thiết kế trình tự nucleotide và biến đổi hóa học, là một hệ quả. Thuốc siRNA có thể kích hoạt hệ thống miễn dịch bẩm sinh, làm giảm phản ứng tại chỗ tiêm (Patiiran, Inclisiran) và giảm tiểu cầu (PLT) (Patisiran, Givosiran). Đánh giá kích thích miễn dịch bao gồm phân tích in vivo các dấu hiệu liên quan và đánh giá in vitro bằng cách sử dụng tế bào đơn nhân máu ngoại vi phân lập hoặc máu toàn phần để dự đoán sự giải phóng cytokine.
Các tác động mục tiêu không-lai-liên quan đến-mục tiêu, chẳng hạn như thay đổi chức năng đông máu, cũng có thể xảy ra. Một số loại thuốc siRNA nhất định ức chế chọn lọc Yếu tố IXa và đồng yếu tố VIIIa trong dòng đông máu, làm thay đổi thời gian tác dụng của rombin và ức chế gián tiếp quá trình đông máu (ví dụ Patisiran, Lumasiran, APTT tăng nhẹ). Ngoài ra, thuốc siRNA có thể liên kết với chất ức chế H, kích hoạt con đường bỏ qua bổ thể. Việc kích hoạt quá mức bổ sung có thể làm gián đoạn chức năng của nó, dẫn đến viêm thứ phát và viêm mạch (ví dụ: Patisiran{10}}gây ra sự gia tăng C3a, thâm nhiễm viêm gan, viêm quanh mạch máu ở vị trí tiêm truyền).
Độc tính của hệ thống phân phối: Đừng bỏ qua nhà cung cấp dịch vụ
Hệ thống phân phối, thường là LNP, cũng đáng được quan tâm. Tá dược mới hoặc tỷ lệ thành phần bị thay đổi trong LNP đòi hỏi phải điều tra kỹ lưỡng. Mặc dù các hướng dẫn LNP cụ thể vẫn chưa có, nhưng các hướng dẫn hiện có như "Hướng dẫn cho ngành: Hóa học, sản xuất và kiểm soát sản phẩm Lipiodol; Dược động học và sinh khả dụng ở người; Và tài liệu ghi nhãn" có thể cung cấp những hiểu biết có giá trị. Các cuộc điều tra LNP của Patisiran cũng có thể dùng làm tài liệu tham khảo. Đáng chú ý, nếu LNP thuộc tiêu chuẩn đăng ký tá dược không{4}}độc lập, thì chúng có thể được nghiên cứu cùng với siRNA với cùng loài động vật như đánh giá an toàn phi lâm sàng của siRNA, xem xét yêu cầu về hai-loài đối với siRNA.
Phần kết luận:
Lĩnh vực trị liệu bằng siRNA tiếp tục phát triển với trọng tâm là cải thiện hệ thống phân phối, sửa đổi hóa học, giảm thiểu-tác dụng ngoài mục tiêu và mở rộng chỉ định. Công nghệ sinh học Prisys vẫn cam kết phát triển các liệu pháp cải tiến dựa trên siRNA-, tận dụng kiến thức chuyên môn của chúng tôi về hệ thống phát hiện và phân phối thuốc. Chúng tôi cố gắng đưa ra các phương pháp điều trị mang tính thay đổi nhằm giải quyết các nhu cầu y tế chưa được đáp ứng và cải thiện kết quả của bệnh nhân.
